სიახლეები

გმადლობთ, რომ ეწვიეთ Nature.com-ს. თქვენს მიერ გამოყენებულ ბრაუზერის ვერსიას CSS-ის შეზღუდული მხარდაჭერა აქვს. საუკეთესო გამოცდილებისთვის გირჩევთ გამოიყენოთ განახლებული ბრაუზერი (ან გამორთოთ თავსებადობის რეჟიმი Internet Explorer-ში). ამასობაში, მხარდაჭერის უწყვეტი უზრუნველყოფის მიზნით, საიტს სტილებისა და JavaScript-ის გარეშე ვაჩვენებთ.
მობილური ტელეფონიის კომუნიკაციის მუდმივად მზარდმა მოთხოვნამ გამოიწვია უკაბელო ტექნოლოგიების (G) უწყვეტი გაჩენა, რამაც შეიძლება განსხვავებული გავლენა მოახდინოს ბიოლოგიურ სისტემებზე. ამის შესამოწმებლად, ჩვენ ვირთხები 2 საათის განმავლობაში ერთ თავზე ვატარებდით 4G გრძელვადიანი ევოლუციის (LTE) - 1800 MHz ელექტრომაგნიტური ველის (EMF) ზემოქმედებას. შემდეგ შევაფასეთ ლიპოპოლისაქარიდით გამოწვეული მწვავე ნეიროანთების გავლენა მიკროგლიის სივრცულ დაფარვასა და პირველადი სმენის ქერქის (ACx) ელექტროფიზიოლოგიურ ნეირონულ აქტივობაზე. ACx-ში საშუალო SAR არის 0.5 W/kg. მრავალერთეულიანი ჩანაწერები აჩვენებს, რომ LTE-EMF იწვევს სუფთა ტონებსა და ბუნებრივ ვოკალიზაციებზე რეაქციის ინტენსივობის შემცირებას, ხოლო დაბალი და საშუალო სიხშირეების აკუსტიკური ზღურბლის ზრდას. Iba1 იმუნოჰისტოქიმიამ არ აჩვენა ცვლილებები მიკროგლიური სხეულებითა და პროცესებით დაფარულ არეალში. ჯანმრთელ ვირთხებში, იგივე LTE ზემოქმედებამ არ გამოიწვია რეაქციის ინტენსივობის და აკუსტიკური ზღურბლების ცვლილებები. ჩვენი მონაცემები აჩვენებს, რომ მწვავე ნეიროანთება ნეირონებს აგრძნობინებს LTE-EMF-ის მიმართ, რაც იწვევს აკუსტიკური სტიმულების დამუშავების შეცვლას ACx-ში.
კაცობრიობის ელექტრომაგნიტური გარემო ბოლო სამი ათწლეულის განმავლობაში მკვეთრად შეიცვალა უკაბელო კომუნიკაციების უწყვეტი გაფართოების გამო. ამჟამად, მოსახლეობის ორ მესამედზე მეტი მობილური ტელეფონის (MP) მომხმარებლად ითვლება. ამ ტექნოლოგიის ფართომასშტაბიანმა გავრცელებამ შეშფოთება და დებატები გამოიწვია რადიოსიხშირული (RF) დიაპაზონში პულსირებული ელექტრომაგნიტური ველების (EMF) პოტენციურად საშიში ეფექტების შესახებ, რომლებსაც MP-ები ან საბაზო სადგურები ასხივებენ და აკოდირებენ კომუნიკაციებს. საზოგადოებრივი ჯანმრთელობის ამ საკითხმა შთააგონა არაერთი ექსპერიმენტული კვლევა, რომელიც მიეძღვნა რადიოსიხშირული შთანთქმის ეფექტების შესწავლას ბიოლოგიურ ქსოვილებში1. ამ კვლევებიდან ზოგიერთი ნეირონული ქსელის აქტივობისა და კოგნიტური პროცესების ცვლილებებს ეძებდა, ტვინის სიახლოვის გათვალისწინებით RF წყაროებთან MP-ის ფართოდ გავრცელებული გამოყენების პირობებში. მრავალი მოხსენებული კვლევა ეხება მეორე თაობის (2G) მობილური კომუნიკაციების გლობალურ სისტემაში (GSM) ან ფართოზოლოვანი კოდის გაყოფის მრავალჯერადი წვდომის (WCDMA)/მესამე თაობის უნივერსალურ მობილურ ტელეკომუნიკაციების სისტემებში (WCDMA/3G UMTS)2,3,4,5 გამოყენებული პულსური მოდულირებული სიგნალების ეფექტებს2. ცოტა რამ არის ცნობილი მეოთხე თაობის (4G) მობილურ სერვისებში გამოყენებული რადიოსიხშირული სიგნალების ეფექტების შესახებ, რომლებიც მთლიანად ციფრულ ინტერნეტ პროტოკოლზეა დამოკიდებული. ტექნოლოგიას, რომელსაც გრძელვადიანი ევოლუციის (LTE) ტექნოლოგია ეწოდება. 2011 წელს გამოშვებული LTE ტელეფონის სერვისი, სავარაუდოდ, 2022 წლის იანვარში გლობალურ LTE აბონენტთა რიცხვს 6.6 მილიარდს მიაღწევს (GSMA: //gsacom.com). ერთმატარებლიანი მოდულაციის სქემებზე დაფუძნებულ GSM (2G) და WCDMA (3G) სისტემებთან შედარებით, LTE ძირითად სიგნალის ფორმატად ორთოგონალურ სიხშირის გაყოფის მულტიპლექსირებას (OFDM) იყენებს. მსოფლიო მასშტაბით, LTE მობილური სერვისები იყენებენ სხვადასხვა სიხშირის დიაპაზონებს 450-დან 3700 MHz-მდე, მათ შორის 900 და 1800 MHz დიაპაზონებს, რომლებიც ასევე გამოიყენება GSM-ში.
რადიოსიხშირული გამოსხივების ბიოლოგიურ პროცესებზე ზემოქმედების უნარი დიდწილად განისაზღვრება ვატ/კგ-ში გამოხატული სპეციფიკური შთანთქმის სიჩქარით (SAR), რომელიც ზომავს ბიოლოგიურ ქსოვილში შთანთქმულ ენერგიას. ჯანმრთელ ადამიანებში ცოტა ხნის წინ შესწავლილ იქნა 2.573 გჰც სიხშირის LTE სიგნალების მწვავე 30-წუთიანი ზემოქმედების გავლენა გლობალურ ნეირონულ ქსელურ აქტივობაზე. მოსვენების მდგომარეობაში fMRI-ის გამოყენებით დაფიქსირდა, რომ LTE-ს ზემოქმედებამ შეიძლება გამოიწვიოს სპონტანური ნელი სიხშირის რყევები და ცვლილებები შიდა ან რეგიონთაშორის კავშირში, მაშინ როდესაც 10 გ ქსოვილზე საშუალოდ სივრცითი პიკური SAR დონეები შეფასებულია, როგორც 0.42-დან 1.52 ვატ/კგ-მდე, თემების 7, 8, 9 მიხედვით. მსგავსი ზემოქმედების პირობებში (30 წუთიანი ხანგრძლივობა, სავარაუდო პიკური SAR დონე 1.34 ვატ/კგ, წარმომადგენლობითი ადამიანის თავის მოდელის გამოყენებით) EEG ანალიზმა აჩვენა სპექტრული სიმძლავრის და ნახევარსფეროს კოჰერენტობის შემცირება ალფა და ბეტა ზოლებში. თუმცა, EEG ანალიზზე დაფუძნებულმა ორმა სხვა კვლევამ აჩვენა, რომ LTE-ს თავზე 20 ან 30 წუთიანი ექსპოზიცია, მაქსიმალური ლოკალური SAR დონეებით დაახლოებით 2 ვატ/კგ-ზე, ან... არ ჰქონდა შესამჩნევი ეფექტი11 ან იწვევდა ალფა დიაპაზონში სპექტრული სიმძლავრის შემცირებას, მაშინ როდესაც კოგნიცია არ შეცვლილა სტროოპის ტესტით შეფასებულ ფუნქციაში12. მნიშვნელოვანი განსხვავებები ასევე აღმოჩნდა EEG-ს ან კოგნიტური კვლევების შედეგებში, რომლებიც კონკრეტულად GSM ან UMTS ელექტრომაგნიტური ველის ზემოქმედების ეფექტებს შეისწავლიდნენ. ითვლება, რომ ისინი წარმოიქმნება მეთოდის დიზაინისა და ექსპერიმენტული პარამეტრების ვარიაციებიდან, მათ შორის სიგნალის ტიპისა და მოდულაციის, ზემოქმედების ინტენსივობისა და ხანგრძლივობის, ან ადამიანებში ასაკის, ანატომიის ან სქესის მიხედვით ჰეტეროგენულობიდან.
ჯერჯერობით, ცხოველებზე ჩატარებული კვლევების მცირე რაოდენობა იქნა გამოყენებული იმის დასადგენად, თუ როგორ მოქმედებს LTE სიგნალიზაციის ზემოქმედება ტვინის ფუნქციაზე. ცოტა ხნის წინ გავრცელდა ინფორმაცია, რომ განვითარებადი თაგვების სისტემურმა ზემოქმედებამ გვიანი ემბრიონული სტადიიდან ძუძუთი კვების შეწყვეტამდე (30 წთ/დღეში, კვირაში 5 დღე, საშუალოდ მთელი სხეულის SAR 0.5 ან 1 W/kg) გამოიწვია მოტორული და მადის ქცევის ცვლილება ზრდასრულ ასაკში14. ზრდასრულ ვირთხებში განმეორებითი სისტემური ზემოქმედება (2 ჰა დღეში 6 კვირის განმავლობაში) იწვევს ჟანგვით სტრესს და ამცირებს მხედველობის ნერვიდან მიღებული ვიზუალური გამოწვეული პოტენციალის ამპლიტუდას, მაქსიმალური SAR შეფასებულია 10 mW/kg-მდე15.
მრავალ მასშტაბზე, მათ შორის უჯრედულ და მოლეკულურ დონეზე ანალიზთან ერთად, მღრღნელების მოდელების გამოყენება შესაძლებელია დაავადების დროს რადიოსიხშირული ზემოქმედების ეფექტების შესასწავლად, როგორც ადრე ფოკუსირებული იყო GSM ან WCDMA/3G UMTS ელექტრომაგნიტურ ველზე მწვავე ნეიროანთების კონტექსტში. კვლევებმა აჩვენა კრუნჩხვების, ნეიროდეგენერაციული დაავადებების ან გლიომების ეფექტები 16,17,18,19,20.
ლიპოპოლისაქარიდის (LPS) ინექციით შეყვანილი მღრღნელები წარმოადგენენ მწვავე ნეიროანთებითი რეაქციების კლასიკურ პრეკლინიკურ მოდელს, რომელიც დაკავშირებულია ვირუსებით ან ბაქტერიებით გამოწვეულ კეთილთვისებიან ინფექციურ დაავადებებთან, რომლებიც ყოველწლიურად აზიანებენ მოსახლეობის უმრავლესობას. ეს ანთებითი მდგომარეობა იწვევს შექცევად დაავადებას და დეპრესიულ ქცევით სინდრომს, რომელიც ხასიათდება ცხელებით, მადის დაკარგვით და სოციალური ურთიერთქმედების შემცირებით. ცენტრალური ნერვული სისტემის რეზიდენტი ფაგოციტები, როგორიცაა მიკროგლია, ამ ნეიროანთებითი პასუხის ძირითადი ეფექტორული უჯრედებია. მღრღნელების LPS-ით მკურნალობა იწვევს მიკროგლიის აქტივაციას, რომელიც ხასიათდება მათი ფორმისა და უჯრედული პროცესების რემოდელირებით და ტრანსკრიპტომის პროფილის ღრმა ცვლილებებით, მათ შორის პროანთებითი ციტოკინების ან ფერმენტების კოდირების გენების აქტივაციის ზრდით, რომლებიც გავლენას ახდენენ ნეირონულ ქსელებზე. აქტივობები 22, 23, 24.
LPS-ით დამუშავებულ ვირთხებში GSM-1800 MHz ელექტრომაგნიტური ველის 2-საათიანი ერთჯერადი ზემოქმედების შესწავლისას, ჩვენ აღმოვაჩინეთ, რომ GSM სიგნალიზაცია იწვევს უჯრედულ რეაქციებს თავის ტვინის ქერქში, რაც გავლენას ახდენს გენის ექსპრესიაზე, გლუტამატის რეცეპტორების ფოსფორილირებაზე, ნეირონულ მეტა-გამოწვეულ აგზნებასა და მიკროგლიის მორფოლოგიაზე თავის ტვინის ქერქში. ეს ეფექტები არ დაფიქსირებულა ჯანმრთელ ვირთხებში, რომლებმაც მიიღეს იგივე GSM ზემოქმედება, რაც იმაზე მიუთითებს, რომ LPS-ით გამოწვეული ნეიროანთებითი მდგომარეობა ზრდის ცენტრალური ნერვული სისტემის უჯრედების მგრძნობელობას GSM სიგნალიზაციის მიმართ. LPS-ით დამუშავებული ვირთხების სმენით კორტექსზე (ACx) ფოკუსირებით, სადაც ადგილობრივი SAR საშუალოდ 1.55 ვტ/კგ იყო, ჩვენ დავაკვირდით, რომ GSM ზემოქმედებამ გამოიწვია მიკროგლიური პროცესების სიგრძის ან განშტოების ზრდა და სუფთა ტონებითა და ნეირონული რეაქციების შემცირება. ბუნებრივი სტიმულაცია 28.
ამჟამინდელ კვლევაში ჩვენი მიზანი იყო შეგვესწავლა, შეეძლო თუ არა LTE-1800 MHz სიგნალების მხოლოდ თავის ზემოქმედებას ასევე შეეცვალა მიკროგლიური მორფოლოგია და ნეირონული აქტივობა ACx-ში, რაც ზემოქმედების სიმძლავრეს ორი მესამედით შეამცირებდა. აქ ჩვენ ვაჩვენებთ, რომ LTE სიგნალიზაციას გავლენა არ მოუხდენია მიკროგლიურ პროცესებზე, მაგრამ მაინც იწვევდა ხმით გამოწვეული კორტიკალური აქტივობის მნიშვნელოვან შემცირებას LPS-ით დამუშავებული ვირთხების ACx-ში 0.5 ვტ/კგ SAR მნიშვნელობით.
წინა მტკიცებულებების გათვალისწინებით, რომ GSM-1800 MHz-ის ზემოქმედება ცვლის მიკროგლიის მორფოლოგიას პროანთებითი პირობების დროს, ჩვენ გამოვიკვლიეთ ეს ეფექტი LTE სიგნალიზაციის ზემოქმედების შემდეგ.
ზრდასრულ ვირთხებს LPS ინექცია ჩაუტარდათ თავის ცრუ ზემოქმედებამდე 24 საათით ადრე ან LTE-1800 MHz-ის ზემოქმედებამდე. ზემოქმედების შემდეგ, LPS-ით გამოწვეული ნეიროანთებითი რეაქციები განვითარდა თავის ტვინის ქერქში, რაც ნაჩვენებია პროანთებითი გენების აქტივაციით და კორტიკალური მიკროგლიის მორფოლოგიის ცვლილებებით (სურათი 1). LTE თავის მიერ გამოყოფილი სიმძლავრე დაყენებული იყო ACx-ში საშუალო SAR დონის 0.5 ვტ/კგ მისაღებად (სურათი 2). იმის დასადგენად, რეაგირებდა თუ არა LPS-აქტივირებული მიკროგლია LTE ელექტრომაგნიტურ ველზე, ჩვენ გავაანალიზეთ ანტი-Iba1-ით შეღებილი კორტიკალური მონაკვეთები, რომლებიც შერჩევით ასახელებდნენ ამ უჯრედებს. როგორც ნაჩვენებია სურათ 3ა-ზე, ACx მონაკვეთებში, რომლებიც ფიქსირდებოდა ცრუ ან LTE ზემოქმედებიდან 3-4 საათის შემდეგ, მიკროგლია საოცრად ჰგავდა ერთმანეთს, აჩვენებდა „მკვრივი მსგავსი“ უჯრედების მორფოლოგიას, რომელიც გამოწვეული იყო LPS-ის პროანთებითი მკურნალობით (სურათი 1). მორფოლოგიური რეაქციების არარსებობის შესაბამისად, რაოდენობრივმა გამოსახულების ანალიზმა არ გამოავლინა მნიშვნელოვანი განსხვავებები მთლიან ფართობში (დაუწყვილებელი t-ტესტი, p = 0.308) ან ფართობში (p = 0.196). და Iba1 იმუნორეაქტიულობის სიმკვრივე (p = 0.061), როდესაც შედარებულია LTE ვირთხებში Iba 1-ით შეღებილი უჯრედული სხეულების ექსპოზიცია ცრუ ექსპოზიციის მქონე ცხოველებთან (სურ. 3ბ-დ).
LPS ip ინექციის გავლენა კორტიკალურ მიკროგლიის მორფოლოგიაზე. მიკროგლიის წარმომადგენლობითი ხედი თავის ტვინის ქერქის კორონალურ მონაკვეთში (დორსომედალური რეგიონი) LPS-ის ან გამხსნელის (კონტროლი) ინტრაპერიტონეალური ინექციიდან 24 საათის შემდეგ. უჯრედები შეღებილი იქნა Iba1-ის საწინააღმდეგო ანტისხეულით, როგორც ადრე იყო აღწერილი. LPS-ის ანთების საწინააღმდეგო მკურნალობამ გამოიწვია მიკროგლიის მორფოლოგიის ცვლილებები, მათ შორის პროქსიმალური გასქელება და უჯრედული პროცესების მოკლე მეორადი ტოტების ზრდა, რამაც გამოიწვია „მკვრივის მსგავსი“ იერსახე. მასშტაბის ზოლი: 20 µm.
ვირთხის ტვინში სპეციფიკური შთანთქმის სიჩქარის (SAR) დოზიმეტრიული ანალიზი 1800 MHz LTE-ის ზემოქმედების დროს. ტვინში ლოკალური SAR-ის შესაფასებლად გამოყენებული იქნა ფანტომური ვირთხისა და მარყუჟოვანი ანტენის62 ადრე აღწერილი ჰეტეროგენული მოდელი, 0.5 მმ3 კუბური ბადით. (ა) ვირთხის მოდელის გლობალური ხედი ექსპოზიციის გარემოში, თავის ზემოთ მარყუჟოვანი ანტენით და სხეულის ქვემოთ მეტალის თერმული ბალიშით (ყვითელი). (ბ) SAR მნიშვნელობების განაწილება ზრდასრული ადამიანის ტვინში 0.5 მმ3 სივრცითი გარჩევადობით. საგიტალურ მონაკვეთში შავი კონტურით შემოსაზღვრული არე შეესაბამება პირველად სმენის კორტექსს, სადაც გაანალიზებულია მიკროგლიური და ნეირონული აქტივობა. SAR მნიშვნელობების ფერადი კოდირებული შკალა ვრცელდება ნახაზზე ნაჩვენებ ყველა რიცხვით სიმულაციაზე.
LPS-ით შეყვანილი მიკროგლია ვირთხის აუდიტორულ ქერქში LTE ან Sham-ის ზემოქმედების შემდეგ. (ა) LPS-პერფუზირებული ვირთხის აუდიტორული ქერქის კორონალურ მონაკვეთებში მიკროგლიის წარმომადგენლობითი დაწყობილი ხედი Sham-ით ან LTE-ით ექსპოზიციიდან 3-4 საათის შემდეგ (ექსპოზიცია). მასშტაბის ზოლი: 20 µm. (ბდ) მიკროგლიის მორფომეტრიული შეფასება Sham-ით (ღია წერტილები) ან LTE ექსპოზიციიდან 3-4 საათის შემდეგ (ექსპოზიცია, შავი წერტილები). (ბ, გ) მიკროგლიის მარკერის Iba1-ის სივრცითი დაფარვა (ბ) და Iba1-დადებითი უჯრედული სხეულების ფართობები (გ). მონაცემები წარმოადგენს Iba1-ის საწინააღმდეგო შეღებვის ფართობს, ნორმალიზებული Sham-ით ექსპოზიციის მქონე ცხოველების საშუალო მაჩვენებელთან. (დ) Iba1-ის საწინააღმდეგო შეღებილი მიკროგლიური უჯრედული სხეულების რაოდენობა. Sham-ით (n = 5) და LTE (n = 6) ცხოველებს შორის განსხვავებები არ იყო მნიშვნელოვანი (p > 0.05, დაუწყვილებელი t-ტესტი). ჩარჩოს ზედა და ქვედა ნაწილები, ზედა და ქვედა ხაზები წარმოადგენს 25-75-ე პროცენტილს. და შესაბამისად, 5-95-ე პროცენტილი. საშუალო მნიშვნელობა ჩარჩოში წითლად არის მონიშნული.
ცხრილი 1 აჯამებს ცხოველების რაოდენობას და მრავალერთეულიან ჩანაწერებს, რომლებიც მიღებულია ვირთხების ოთხი ჯგუფის (Sham, Exposed, Sham-LPS, Exposed-LPS) პირველად აუდიტორულ ქერქში. ქვემოთ მოცემულ შედეგებში ჩვენ შევიტანეთ ყველა ჩანაწერი, რომელიც ავლენს მნიშვნელოვან სპექტრულ დროებით რეცეპტურ ველს (STRF), ანუ ტონზე გამოწვეული რეაქციები, რომლებიც მინიმუმ 6 სტანდარტული გადახრით მეტია სპონტანური გასროლის სიხშირეზე (იხ. ცხრილი 1). ამ კრიტერიუმის გამოყენებით, ჩვენ შევარჩიეთ 266 ჩანაწერი Sham ჯგუფისთვის, 273 ჩანაწერი Exposed ჯგუფისთვის, 299 ჩანაწერი Sham-LPS ჯგუფისთვის და 295 ჩანაწერი Exposed-LPS ჯგუფისთვის.
შემდეგ აბზაცებში თავდაპირველად აღვწერთ სპექტრულ-დროითი რეცეპტური ველიდან (ანუ სუფთა ტონებზე რეაქცია) ამოღებულ პარამეტრებს და ქსენოგენურ სპეციფიკურ ვოკალიზაციებზე რეაქციას. შემდეგ აღვწერთ თითოეული ჯგუფისთვის მიღებული სიხშირული რეაქციის არეალის რაოდენობრივ განსაზღვრას. ჩვენს ექსპერიმენტულ დიზაინში „ჩდგმული მონაცემების“30 არსებობის გათვალისწინებით, ყველა სტატისტიკური ანალიზი ჩატარდა ელექტროდების მასივში პოზიციების რაოდენობის მიხედვით (ცხრილი 1-ის ბოლო რიგი), მაგრამ ქვემოთ აღწერილი ყველა ეფექტი ასევე ეფუძნებოდა თითოეულ ჯგუფში პოზიციების რაოდენობას. შეგროვებული მრავალერთეულიანი ჩანაწერების საერთო რაოდენობა (ცხრილი 1-ის მესამე რიგი).
სურათი 4ა გვიჩვენებს LPS-ით დამუშავებულ Sham-ით და ექსპოზიციის ქვეშ მყოფ ცხოველებში მიღებული კორტიკალური ნეირონების ოპტიმალურ სიხშირულ განაწილებას (BF, რომელიც იწვევს მაქსიმალურ რეაქციას 75 dB SPL-ზე). BF-ის სიხშირის დიაპაზონი ორივე ჯგუფში გაფართოვდა 1 kHz-დან 36 kHz-მდე. სტატისტიკურმა ანალიზმა აჩვენა, რომ ეს განაწილებები მსგავსი იყო (ქი-კვადრატი, p = 0.278), რაც იმაზე მიუთითებს, რომ ორ ჯგუფს შორის შედარება შესაძლებელია შერჩევის მიკერძოების გარეშე.
LTE ზემოქმედების გავლენა LPS-ით დამუშავებულ ცხოველებში კორტიკალური რეაქციების რაოდენობრივ პარამეტრებზე. (ა) BF-ის განაწილება LTE-ით დამუშავებული ცხოველების კორტიკალურ ნეირონებში, რომლებიც ექსპოზიციის ქვეშ იყვნენ LTE-ს (შავი) და LTE-ს ცრუ ექსპოზიციის ქვეშ (თეთრი). ორ განაწილებას შორის განსხვავება არ არის. (ბფ) LTE ზემოქმედების გავლენა სპექტრული დროითი რეცეპტული ველის (STRF) რაოდენობრივ პარამეტრებზე. რეაქციის სიძლიერე მნიშვნელოვნად შემცირდა (*p < 0.05, დაუწყვილებელი t-ტესტი) როგორც STRF-ის (საერთო რეაქციის სიძლიერე), ასევე ოპტიმალური სიხშირეების მიხედვით (ბ,გ). რეაქციის ხანგრძლივობა, რეაქციის გამტარობა და გამტარობის მუდმივა (დფ). ვოკალიზაციებზე რეაქციების როგორც სიძლიერე, ასევე დროითი სანდოობა შემცირდა (გ, თ). სპონტანური აქტივობა მნიშვნელოვნად არ შემცირებულა (ი). (*p < 0.05, დაუწყვილებელი t-ტესტი). (ჯ,კ) LTE ზემოქმედების გავლენა კორტიკალურ ზღურბლებზე. საშუალო ზღურბლები მნიშვნელოვნად მაღალი იყო LTE-ით დამუშავებულ ვირთხებში, ცრუ ექსპოზიციის ქვეშ მყოფ ვირთხებთან შედარებით. ეს ეფექტი უფრო გამოხატულია დაბალ და საშუალო სიხშირეები.
ნახაზი 4b-f აჩვენებს STRF-დან მიღებული პარამეტრების განაწილებას ამ ცხოველებისთვის (საშუალო მაჩვენებლები მითითებულია წითელი ხაზებით). LTE ზემოქმედების ზემოქმედება LPS-ით დამუშავებულ ცხოველებზე, როგორც ჩანს, ნეირონული აგზნებადობის შემცირებაზე მიუთითებს. პირველ რიგში, საერთო რეაქციის ინტენსივობა და რეაქციები მნიშვნელოვნად დაბალი იყო BF-ში Sham-LPS ცხოველებთან შედარებით (ნახ. 4b,c შეუწყვილებელი t-ტესტი, p = 0.0017; და p = 0.0445). ანალოგიურად, საკომუნიკაციო ბგერებზე რეაქციები შემცირდა როგორც რეაქციის სიძლიერის, ასევე საცდელ პერიოდებს შორის სანდოობის მხრივ (ნახ. 4g,h; შეუწყვილებელი t-ტესტი, p = 0.043). სპონტანური აქტივობა შემცირდა, მაგრამ ეს ეფექტი მნიშვნელოვანი არ იყო (ნახ. 4i; p = 0.0745). რეაქციის ხანგრძლივობაზე, რეგულირების გამტარობაზე და რეაქციის ლატენტობაზე გავლენა არ მოუხდენია LPS-ით დამუშავებულ ცხოველებში LTE-ის ზემოქმედებას (ნახ. 4d-f), რაც მიუთითებს, რომ სიხშირის სელექციურობაზე და დაწყების რეაქციების სიზუსტეზე გავლენა არ მოუხდენია LPS-ით დამუშავებულ ცხოველებში LTE-ის ზემოქმედებას.
შემდეგ შევაფასეთ, შეიცვალა თუ არა სუფთა ტონალური კორტიკალური ზღურბლები LTE-ს ზემოქმედებით. თითოეული ჩანაწერიდან მიღებული სიხშირული რეაქციის არედან (FRA), ჩვენ განვსაზღვრეთ თითოეული სიხშირის სმენითი ზღურბლები და გავზომეთ ეს ზღურბლები ცხოველების ორივე ჯგუფისთვის. სურათი 4j გვიჩვენებს საშუალო (± ნახევრად) ზღურბლებს 1.1-დან 36 kHz-მდე LPS-ით დამუშავებულ ვირთხებში. Sham და Exposed ჯგუფების სმენითი ზღურბლების შედარებამ აჩვენა ზღურბლების მნიშვნელოვანი ზრდა Sham ცხოველებთან შედარებით ექსპოზიციურ ცხოველებში (სურ. 4j), ეფექტი, რომელიც უფრო გამოხატული იყო დაბალ და საშუალო სიხშირეებზე. უფრო ზუსტად, დაბალ სიხშირეებზე (< 2.25 kHz), მაღალი ზღურბლის მქონე A1 ნეირონების პროპორცია გაიზარდა, ხოლო დაბალი და საშუალო ზღურბლის მქონე ნეირონების პროპორცია შემცირდა (ქი-კვადრატი = 43.85; p < 0.0001; სურათი 4k, მარცხენა სურათი). იგივე ეფექტი დაფიქსირდა საშუალო სიხშირეზე (2.25 < Freq(kHz) < 11): შუალედური ზღურბლების მქონე კორტიკალური ჩანაწერების უფრო მაღალი წილი და დაბალი ზღურბლების მქონე ნეირონების უფრო მცირე წილი, არაექსპოზიციურ ჯგუფთან შედარებით (Chi-Square = 71.17; p < 0.001; სურათი 4k, შუა პანელი). ასევე მნიშვნელოვანი განსხვავება იყო მაღალი სიხშირის ნეირონების ზღურბლში (≥ 11 kHz, p = 0.0059); დაბალი ზღურბლების მქონე ნეირონების წილი შემცირდა და საშუალო-მაღალი ზღურბლების წილი გაიზარდა (chi-square = 10.853; p = 0.04 სურათი 4k, მარჯვენა პანელი).
სურათი 5ა გვიჩვენებს ჯანმრთელ ცხოველებში Sham და Exposed ჯგუფებისთვის მიღებული კორტიკალური ნეირონების ოპტიმალურ სიხშირულ განაწილებას (BF, მაქსიმალური პასუხის გამოწვევით 75 dB SPL-ზე). სტატისტიკურმა ანალიზმა აჩვენა, რომ ორივე განაწილება მსგავსი იყო (ქი-კვადრატი, p = 0.157), რაც იმაზე მიუთითებს, რომ ორ ჯგუფს შორის შედარება შესაძლებელია შერჩევის მიკერძოების გარეშე.
LTE ზემოქმედების გავლენა ჯანმრთელ ცხოველებში კორტიკალური რეაქციების რაოდენობრივ პარამეტრებზე. (ა) BF-ის განაწილება ჯანმრთელი ცხოველების კორტიკალურ ნეირონებში, რომლებიც იმყოფებოდნენ LTE-ს ზემოქმედების ქვეშ (მუქი ლურჯი) და LTE-ს ცრუ ზემოქმედების ქვეშ (ღია ლურჯი). ორ განაწილებას შორის განსხვავება არ არის. (ბფ) LTE ზემოქმედების გავლენა სპექტრული დროითი რეცეპტული ველის (STRF) რაოდენობრივ პარამეტრებზე. STRF-სა და ოპტიმალურ სიხშირეებზე რეაქციის ინტენსივობაში მნიშვნელოვანი ცვლილება არ დაფიქსირებულა (ბ, გ). რეაქციის ხანგრძლივობა უმნიშვნელოდ გაიზარდა (დ), მაგრამ რეაქციის გამტარობა და გამტარობა არ შეცვლილა (ე, ვ). ვოკალიზაციებზე რეაქციის არც სიძლიერე და არც დროითი სანდოობა არ შეცვლილა (გ, თ). სპონტანურ აქტივობაში მნიშვნელოვანი ცვლილება არ დაფიქსირებულა (ი). (*p < 0.05 დაუწყვილებელი t-ტესტი). (ჯ, კ) LTE ზემოქმედების გავლენა კორტიკალურ ზღურბლებზე. საშუალოდ, ზღურბლები მნიშვნელოვნად არ შეცვლილა LTE-ს ზემოქმედების ქვეშ მყოფ ვირთხებში, ცრუ ზემოქმედების ქვეშ მყოფ ვირთხებთან შედარებით, მაგრამ უფრო მაღალი სიხშირის ზღურბლები ოდნავ დაბალი იყო ექსპოზიციის ქვეშ მყოფ ცხოველებში.
ნახაზი 5b-f გვიჩვენებს ჩარჩოების დიაგრამებს, რომლებიც წარმოადგენენ STRF-ების ორი ნაკრებიდან მიღებული პარამეტრების განაწილებას და საშუალოს (წითელი ხაზი). ჯანმრთელ ცხოველებში, LTE-ს ზემოქმედებას თავად მცირე გავლენა ჰქონდა STRF პარამეტრების საშუალო მნიშვნელობაზე. Sham ჯგუფთან შედარებით (ღია vs მუქი ლურჯი ჩარჩოები ექსპოზიციის მქონე ჯგუფისთვის), LTE-ს ზემოქმედებამ არ შეცვალა არც რეაქციის საერთო ინტენსივობა და არც BF-ის რეაქცია (ნახ. 5b,c; შეუწყვილებელი t-ტესტი, p = 0.2176 და p = 0.8696 შესაბამისად). ასევე არ იყო გავლენა სპექტრულ გამტარობაზე და შეყოვნებაზე (p = 0.6764 და p = 0.7129, შესაბამისად), მაგრამ მნიშვნელოვანი ზრდა იყო რეაქციის ხანგრძლივობაში (p = 0.047). ასევე არ იყო გავლენა ვოკალიზაციის რეაქციების სიძლიერეზე (ნახ. 5g, p = 0.4375), ამ რეაქციების საცდელ პერიოდებს შორის სანდოობაზე (ნახ. 5h, p = 0.3412) და სპონტანურ აქტივობაზე (ნახ. 5).5i; p = 0.3256).
სურათი 5j გვიჩვენებს საშუალო (± ნახევრად) ზღურბლებს 1.1-დან 36 კჰც-მდე ჯანმრთელ ვირთხებში. მან არ აჩვენა მნიშვნელოვანი განსხვავება ცრუ და ექსპოზიციის მქონე ვირთხებს შორის, გარდა ოდნავ დაბალი ზღურბლისა მაღალი სიხშირეების (11–36 კჰც) ექსპოზიციის მქონე ცხოველებში (დაუწყვილებელი t-ტესტი, p = 0.0083). ეს ეფექტი ასახავს იმ ფაქტს, რომ ექსპოზიციის მქონე ცხოველებში, ამ სიხშირის დიაპაზონში (ქი-კვადრატი = 18.312, p = 0.001; სურ. 5k), იყო ოდნავ მეტი ნეირონი დაბალი და საშუალო ზღურბლებით (ხოლო მაღალი ზღურბლებით - ნაკლები ნეირონი).
დასკვნის სახით, როდესაც ჯანმრთელ ცხოველებს LTE ზემოქმედება ჰქონდათ, ეს გავლენას არ ახდენდა სუფთა ტონებსა და რთულ ბგერებზე, როგორიცაა ვოკალიზაციები, რეაქციის სიძლიერეზე. გარდა ამისა, ჯანმრთელ ცხოველებში კორტიკალური სმენის ზღურბლები მსგავსი იყო ექსპოზიციის ქვეშ მყოფ და ფიქტიური ცხოველებს შორის, მაშინ როდესაც LPS-ით დამუშავებულ ცხოველებში LTE ზემოქმედებამ გამოიწვია კორტიკალური ზღურბლების მნიშვნელოვანი ზრდა, განსაკუთრებით დაბალი და საშუალო სიხშირის დიაპაზონში.
ჩვენმა კვლევამ აჩვენა, რომ ზრდასრულ მამრ ვირთხებში, რომლებსაც აღენიშნებოდათ მწვავე ნეიროანთება, LTE-1800 MHz-ის ზემოქმედებამ 0.5 W/kg ლოკალური SARACx-ით (იხ. მეთოდები) გამოიწვია ხმით გამოწვეული რეაქციების ინტენსივობის მნიშვნელოვანი შემცირება კომუნიკაციის პირველად ჩანაწერებში. ნეირონული აქტივობის ეს ცვლილებები მოხდა მიკროგლიური პროცესებით დაფარული სივრცითი დომენის რაიმე აშკარა ცვლილების გარეშე. LTE-ს ეს გავლენა კორტიკალური გამოწვეული რეაქციების ინტენსივობაზე ჯანმრთელ ვირთხებში არ დაფიქსირებულა. LTE-ზე ზემოქმედების ქვეშ მყოფ და ცრუ ზემოქმედების ქვეშ მყოფ ცხოველებში ჩაწერის ერთეულებს შორის ოპტიმალური სიხშირის განაწილების მსგავსების გათვალისწინებით, ნეირონული რეაქტიულობის განსხვავებები შეიძლება მივაწეროთ LTE სიგნალების ბიოლოგიურ ეფექტებს და არა შერჩევის მიკერძოებას (სურ. 4ა). გარდა ამისა, LTE-ზე ზემოქმედების ქვეშ მყოფ ვირთხებში პასუხის შეყოვნებისა და სპექტრული რეგულირების გამტარობის ცვლილებების არარსებობა მიუთითებს იმაზე, რომ, სავარაუდოდ, ეს ჩანაწერები აღებული იქნა იმავე კორტიკალური ფენებიდან, რომლებიც განლაგებულია პირველად ACx-ში და არა მეორად რეგიონებში.
ჩვენი ინფორმაციით, LTE სიგნალიზაციის ნეირონულ რეაქციებზე გავლენა აქამდე არ ყოფილა აღწერილი. თუმცა, წინა კვლევებმა დაადასტურა GSM-1800 MHz ან 1800 MHz უწყვეტი ტალღის (CW) უნარი, შეცვალოს ნეირონული აგზნებადობა, თუმცა მნიშვნელოვანი განსხვავებებით ექსპერიმენტული მიდგომის მიხედვით. 1800 MHz CW-ის 8.2 W/Kg SAR დონეზე ზემოქმედების შემდეგ მალევე, ლოკოკინას განგლიებიდან აღებულმა ჩანაწერებმა აჩვენა მოქმედების პოტენციალის გააქტიურებისა და ნეირონული მოდულაციის შემცირებული ზღურბლები. მეორეს მხრივ, ვირთხის ტვინიდან მიღებულ პირველად ნეირონულ კულტურებში პიკური და აფეთქებითი აქტივობა შემცირდა GSM-1800 MHz ან 1800 MHz CW-ის ზემოქმედებით 15 წუთის განმავლობაში 4.6 W/kg SAR-ზე. ეს ინჰიბირება მხოლოდ ნაწილობრივ შექცევადი იყო ექსპოზიციიდან 30 წუთის განმავლობაში. ნეირონების სრული გაჩუმება მიღწეული იქნა 9.2 W/kg SAR-ზე. დოზა-რეაქციის ანალიზმა აჩვენა, რომ GSM-1800 MHz უფრო ეფექტური იყო, ვიდრე 1800. MHz CW აფეთქების აქტივობის დათრგუნვაში, რაც მიუთითებს, რომ ნეირონული რეაქციები დამოკიდებულია რადიოსიხშირული სიგნალის მოდულაციაზე.
ჩვენს პირობებში, კორტიკალური გამოწვეული რეაქციები შეგროვდა in vivo 2-საათიანი მხოლოდ თავის ზემოქმედების დასრულებიდან 3-6 საათის შემდეგ. წინა კვლევაში ჩვენ გამოვიკვლიეთ GSM-1800 MHz-ის ეფექტი SARACx-ზე 1.55 W/kg სიმძლავრით და ვერ აღმოვაჩინეთ მნიშვნელოვანი გავლენა ხმით გამოწვეულ კორტიკალურ რეაქციებზე ჯანმრთელ ვირთხებში. აქ, LTE-1800-ის 0.5 W/kg SARACx-ის ზემოქმედებით ჯანმრთელ ვირთხებში გამოწვეული ერთადერთი მნიშვნელოვანი ეფექტი იყო რეაქციის ხანგრძლივობის უმნიშვნელო ზრდა სუფთა ტონების წარმოდგენისას. ეს ეფექტი ძნელი ასახსნელია, რადგან მას არ ახლავს რეაქციის ინტენსივობის ზრდა, რაც იმაზე მიუთითებს, რომ რეაქციის ეს უფრო ხანგრძლივი ხანგრძლივობა ხდება კორტიკალური ნეირონების მიერ გააქტიურებული მოქმედების პოტენციალის იგივე საერთო რაოდენობის დროს. ერთ-ერთი ახსნა შეიძლება იყოს ის, რომ LTE-ს ზემოქმედებამ შეიძლება შეამციროს ზოგიერთი დამთრგუნველი ინტერნეირონების აქტივობა, რადგან დოკუმენტირებულია, რომ პირველადი ACx-ში უკუკავშირის ინჰიბირება აკონტროლებს პირამიდული უჯრედების რეაქციების ხანგრძლივობას, რომლებიც გამოწვეულია აგზნებადობითი თალამუსის შეყვანით33,34, 35, 36, 37.
ამის საპირისპიროდ, LPS-ით გამოწვეული ნეიროანთებით დაქვემდებარებულ ვირთხებში LTE-ს ზემოქმედებას გავლენა არ მოუხდენია ხმით გამოწვეული ნეირონული გააქტიურების ხანგრძლივობაზე, თუმცა მნიშვნელოვანი გავლენა დაფიქსირდა გამოწვეული რეაქციების სიძლიერეზე. სინამდვილეში, LPS-ით ცრუ ზემოქმედების ქვეშ მყოფ ვირთხებში დაფიქსირებულ ნეირონულ რეაქციებთან შედარებით, LPS-ით დამუშავებულ ვირთხებში LTE-ს ზემოქმედების ქვეშ მყოფ ნეირონებში რეაქციების ინტენსივობა შემცირდა, რაც დაფიქსირდა როგორც სუფთა ტონების, ასევე ბუნებრივი ვოკალიზაციის დროს. სუფთა ტონებზე რეაქციის ინტენსივობის შემცირება მოხდა სპექტრული რეგულირების გამტარობის 75 დბ-ით შევიწროების გარეშე და რადგან ეს მოხდა ყველა ხმის ინტენსივობის დროს, ამან გამოიწვია კორტიკალური ნეირონების აკუსტიკური ზღურბლების ზრდა დაბალ და საშუალო სიხშირეებზე.
გამოწვეული რეაქციის სიძლიერის შემცირება მიუთითებს, რომ LPS-ით დამუშავებულ ცხოველებში SARACx-ზე 0.5 W/kg LTE სიგნალიზაციის ეფექტი მსგავსი იყო GSM-1800 MHz-ის ეფექტისა, რომელიც გამოყენებული იყო სამჯერ მაღალი SARACx-ით (1.55 W/kg)28. რაც შეეხება GSM სიგნალიზაციას, LTE-1800 MHz-ის თავის ზემოქმედებამ შეიძლება შეამციროს ნეირონული აგზნებადობა ვირთხის ACx ნეირონებში, რომლებიც დაქვემდებარებულნი იყვნენ LPS-ით გამოწვეული ნეიროანთებით. ამ ჰიპოთეზის შესაბამისად, ჩვენ ასევე დავაკვირდით ტენდენციას ვოკალიზაციაზე ნეირონული რეაქციების კვლევის სანდოობის შემცირებისკენ (სურ. 4h) და სპონტანური აქტივობის შემცირებისკენ (სურ. 4i). თუმცა, in vivo რთული იყო იმის დადგენა, ამცირებს თუ არა LTE სიგნალიზაცია ნეირონულ შინაგან აგზნებადობას თუ სინაფსურ შეყვანას, რითაც აკონტროლებდა ნეირონულ რეაქციებს ACx-ში.
პირველ რიგში, ეს სუსტი რეაქციები შესაძლოა გამოწვეული იყოს ქერქის უჯრედების შინაგანად შემცირებული აგზნებადობით LTE 1800 MHz-ის ზემოქმედების შემდეგ. ამ იდეის მხარდასაჭერად, GSM-1800 MHz და 1800 MHz-CW სიხშირეები ამცირებდნენ აფეთქების აქტივობას, როდესაც ისინი პირდაპირ გამოიყენებოდა კორტიკალური ვირთხის ნეირონების პირველად კულტურებზე, შესაბამისად 3.2 W/kg და 4.6 W/kg SAR დონით, თუმცა აფეთქების აქტივობის მნიშვნელოვნად შესამცირებლად საჭირო იყო SAR-ის ზღვრული დონე. შინაგანი აგზნებადობის შემცირების მომხრე, ჩვენ ასევე დავაკვირდით სპონტანური აფეთქების უფრო დაბალ მაჩვენებლებს ექსპოზიციურ ცხოველებში, ვიდრე ცრუ ექსპოზიციის მქონე ცხოველებში.
მეორეც, LTE-ს ზემოქმედებამ შესაძლოა გავლენა მოახდინოს სინაფსურ გადაცემაზე თალამო-კორტიკალური ან კორტიკალურ-კორტიკალური სინაფსებიდან. ამჟამად მრავალი ჩანაწერი აჩვენებს, რომ სმენის ქერქში სპექტრული რეგულირების სიგანე არ განისაზღვრება მხოლოდ აფერენტული თალამუსის პროექციებით, არამედ ის, რომ ინტრაკორტიკალური კავშირები დამატებით სპექტრულ შეყვანას აწვდის კორტიკალურ უბნებს39,40. ჩვენს ექსპერიმენტებში, ის ფაქტი, რომ კორტიკალურ STRF-ს მსგავსი გამტარობა ჰქონდა ექსპოზიციურ და ცრუ ექსპოზიციის მქონე ცხოველებში, ირიბად მიანიშნებს, რომ LTE-ს ზემოქმედების ეფექტები არ იყო გავლენა კორტიკალურ-კორტიკალურ კავშირზე. ეს ასევე მიუთითებს, რომ SAR-ზე ექსპოზიციის დროს სხვა კორტიკალურ რეგიონებში უფრო მაღალი კავშირი, ვიდრე ACx-ში გაზომილი (სურ. 2) შეიძლება არ იყოს პასუხისმგებელი აქ მოხსენებულ შეცვლილ პასუხებზე.
აქ, LPS-ის ზემოქმედების ქვეშ მყოფი კორტიკალური ჩანაწერების უფრო დიდმა პროპორციამ აჩვენა მაღალი ზღურბლები LPS-ის ცრუ ზემოქმედების ქვეშ მყოფ ცხოველებთან შედარებით. იმის გათვალისწინებით, რომ ვარაუდობენ, რომ კორტიკალური აკუსტიკური ზღურბლი ძირითადად კონტროლდება თალამო-კორტიკალური სინაფსის სიძლიერით39,40, შეიძლება ვივარაუდოთ, რომ თალამო-კორტიკალური გადაცემა ნაწილობრივ მცირდება ზემოქმედებით, პრესინაფსური (გლუტამატის გამოთავისუფლების შემცირება) ან პოსტსინაფსური დონის (რეცეპტორების რაოდენობის ან აფინურობის შემცირება) მიხედვით.
GSM-1800 MHz-ის ეფექტების მსგავსად, LTE-ით გამოწვეული ნეირონული რეაქციების ცვლილება LPS-ით გამოწვეული ნეიროანთების კონტექსტში მოხდა, რაც მიკროგლიური რეაქციებით ხასიათდება. ამჟამინდელი მტკიცებულებები მიუთითებს, რომ მიკროგლია ძლიერ გავლენას ახდენს ნეირონული ქსელების აქტივობაზე ნორმალურ და პათოლოგიურ ტვინებში41,42,43. ნეიროტრანსმისიის მოდულირების მათი უნარი დამოკიდებულია არა მხოლოდ მათ მიერ წარმოქმნილი ნაერთების წარმოებაზე, რომლებმაც შეიძლება შეზღუდონ ან შეზღუდონ ნეიროტრანსმისია, არამედ მათი უჯრედული პროცესების მაღალ მოძრაობაზეც. თავის ტვინის ქერქში, ნეირონული ქსელების როგორც გაზრდილი, ასევე შემცირებული აქტივობა იწვევს მიკროგლიური სივრცითი დომენის სწრაფ გაფართოებას მიკროგლიური პროცესების ზრდის გამო44,45. კერძოდ, მიკროგლიური პროტრუზიები აქტიურდება გააქტიურებული თალამოკორტიკალური სინაფსების მახლობლად და შეუძლია შეაფერხოს ამგზნები სინაფსების აქტივობა მიკროგლიის შუამავლობით ადგილობრივი ადენოზინის გამომუშავების მექანიზმების მეშვეობით.
LPS-ით დამუშავებულ ვირთხებში, რომლებიც GSM-1800 MHz SARACx-ით 1.55 W/kg სიმძლავრით იყვნენ დამუშავებულნი, ACx ნეირონების აქტივობის შემცირება დაფიქსირდა მიკროგლიური პროცესების ზრდასთან ერთად, რაც ACx28-ის ზრდაში Iba1-ით შეღებილი მნიშვნელოვანი უბნებით იყო აღნიშნული. ეს დაკვირვება მიუთითებს, რომ GSM-ის ზემოქმედებით გამოწვეულ მიკროგლიურ რემოდელირებას შეუძლია აქტიურად შეუწყოს ხელი GSM-ით გამოწვეულ ხმით გამოწვეული ნეირონული რეაქციების შემცირებას. ჩვენი ამჟამინდელი კვლევა ეწინააღმდეგება ამ ჰიპოთეზას LTE-ს თავის ზემოქმედების კონტექსტში, როდესაც SARACx 0.5 W/kg-მდეა შეზღუდული, რადგან ჩვენ არ აღმოვაჩინეთ მიკროგლიური პროცესებით დაფარული სივრცითი დომენის ზრდა. თუმცა, ეს არ გამორიცხავს LTE სიგნალიზაციის რაიმე ეფექტს LPS-აქტივირებულ მიკროგლიაზე, რამაც, თავის მხრივ, შეიძლება გავლენა მოახდინოს ნეირონულ აქტივობაზე. ამ კითხვაზე პასუხის გასაცემად და იმ მექანიზმების დასადგენად, რომლითაც მწვავე ნეიროანთება ცვლის ნეირონულ რეაქციებს LTE სიგნალიზაციაზე, საჭიროა შემდგომი კვლევები.
ჩვენი ინფორმაციით, LTE სიგნალების გავლენა სმენით დამუშავებაზე აქამდე არ იყო შესწავლილი. ჩვენმა წინა კვლევებმა26,28 და ამჟამინდელმა კვლევამ აჩვენა, რომ მწვავე ანთების დროს, GSM-1800 MHz ან LTE-1800 MHz სიხშირეზე თავის ზემოქმედება იწვევდა ნეირონულ რეაქციებში ფუნქციურ ცვლილებებს ACx-ში, რაც ნაჩვენებია სმენის ზღურბლის ზრდით. სულ მცირე ორი ძირითადი მიზეზის გამო, კოხლეარული ფუნქცია არ უნდა იყოს დაზარალებული ჩვენი LTE ზემოქმედებით. პირველი, როგორც ნაჩვენებია ნახაზ 2-ზე ნაჩვენებ დოზიმეტრიულ კვლევაში, SAR-ის ყველაზე მაღალი დონეები (დაახლოებით 1 W/kg) მდებარეობს დორსომედიალურ კორტექსში (ანტენის ქვემოთ) და ისინი მნიშვნელოვნად მცირდება, როდესაც ადამიანი უფრო ლატერალურად და ლატერალურად მოძრაობს. თავის ვენტრალური ნაწილი. ის შეიძლება შეფასდეს, როგორც დაახლოებით 0.1 W/kg ვირთხის ყურის დონეზე (ყურის არხის ქვემოთ). მეორე, როდესაც ზღვის გოჭის ყურები 2 თვის განმავლობაში იმყოფებოდა GSM 900 MHz სიხშირეზე (კვირაში 5 დღე, დღეში 1 საათი, SAR 1-დან 4 ვტ/კგ), არ დაფიქსირებულა რაიმე ცვლილებები დამახინჯების პროდუქტის სიდიდეში (ოტოაკუსტიკური ზღურბლები გამოსხივებისა და სმენითი ტვინის ღეროს რეაქციებისთვის 47. გარდა ამისა, GSM 900 ან 1800 MHz სიხშირეზე თავის განმეორებით ზემოქმედებამ 2 ვტ/კგ ლოკალური SAR-ით არ იმოქმედა კოხლეარული გარეთა თმის უჯრედების ფუნქციაზე ჯანმრთელ ვირთხებში48,49. ეს შედეგები იმეორებს ადამიანებში მიღებულ მონაცემებს, სადაც კვლევებმა აჩვენა, რომ GSM მობილური ტელეფონებიდან ელექტრომაგნიტური ველის 10-დან 30 წუთამდე ზემოქმედებას არ აქვს თანმიმდევრული გავლენა სმენით დამუშავებაზე, როგორც ეს შეფასებულია კოხლეარული50,51,52​ან ტვინის ღეროს დონეზე53,54.
ჩვენს კვლევაში, LTE-ით გამოწვეული ნეირონული აქტივაციის ცვლილებები დაფიქსირდა in vivo ზემოქმედების დასრულებიდან 3-6 საათის შემდეგ. ქერქის დორსომედიალურ ნაწილზე ჩატარებულ წინა კვლევაში, GSM-1800 MHz-ით გამოწვეული რამდენიმე ეფექტი, რომელიც დაფიქსირდა ზემოქმედების შემდეგ 24 საათის შემდეგ, აღარ შეინიშნებოდა ზემოქმედების შემდეგ 72 საათის შემდეგ. ეს ეხება მიკროგლიური პროცესების გაფართოებას, IL-1ß გენის დაქვეითებულ რეგულაციას და AMPA რეცეპტორების ტრანსლაციურ მოდიფიკაციას. იმის გათვალისწინებით, რომ სმენის ქერქს აქვს უფრო დაბალი SAR მნიშვნელობა (0.5W/კგ), ვიდრე დორსომედიალურ რეგიონს (2.94W/კგ26), აქ აღწერილი ნეირონული აქტივობის ცვლილებები, როგორც ჩანს, გარდამავალია.
ჩვენი მონაცემები უნდა ითვალისწინებდეს მობილური ტელეფონის მომხმარებლების ტვინის ქერქში მიღწეული SAR-ის ფაქტობრივი მნიშვნელობების შეფასებებს და მათ შეფასებას. საზოგადოების დასაცავად გამოყენებული მოქმედი სტანდარტებით, თავის ან ტორსის რადიოსიხშირეების ლოკალიზებული ზემოქმედებისთვის 100 kHz და 6 GHz რადიოსიხშირული დიაპაზონის ფარგლებში, SAR-ის ზღვარი 2 ვტ/კგ-მდეა დადგენილი.
დოზის სიმულაციები ჩატარდა ადამიანის თავის სხვადასხვა მოდელის გამოყენებით, რათა განესაზღვრა რადიოსიხშირული სიმძლავრის შთანთქმა თავის სხვადასხვა ქსოვილში ზოგადი თავის ან მობილური ტელეფონის კომუნიკაციის დროს. ადამიანის თავის მოდელების მრავალფეროვნების გარდა, ეს სიმულაციები ხაზს უსვამს მნიშვნელოვან განსხვავებებს ან გაურკვევლობებს ტვინის მიერ შთანთქმული ენერგიის შეფასებისას ანატომიური ან ჰისტოლოგიური პარამეტრების საფუძველზე, როგორიცაა თავის ქალის გარე ან შიდა ფორმა, სისქე ან წყლის შემცველობა. თავის სხვადასხვა ქსოვილი მნიშვნელოვნად განსხვავდება ასაკის, სქესის ან ინდივიდის მიხედვით 56,57,58. გარდა ამისა, მობილური ტელეფონის მახასიათებლები, როგორიცაა ანტენის შიდა მდებარეობა და მობილური ტელეფონის პოზიცია მომხმარებლის თავთან მიმართებაში, ძლიერ გავლენას ახდენს SAR მნიშვნელობების დონეზე და განაწილებაზე თავის ტვინის ქერქში 59,60. თუმცა, ადამიანის თავის ტვინის ქერქში SAR-ის განაწილების გათვალისწინებით, რომელიც დადგინდა 1800 MHz დიაპაზონში რადიოსიხშირეების გამოსხივების მქონე მობილური ტელეფონის მოდელებიდან 58, 59, 60, როგორც ჩანს, ადამიანის სმენის ქერქში მიღწეული SAR დონეები ჯერ კიდევ არასაკმარისად გამოიყენება ადამიანის თავის ტვინის ქერქის ნახევარზე. ჩვენი კვლევა (SARACx 0.5 ვტ/კგ). შესაბამისად, ჩვენი მონაცემები არ ეჭვქვეშ აყენებს საზოგადოებისთვის გამოსაყენებელი SAR მნიშვნელობების მიმდინარე ზღვრულ ლიმიტებს.
დასკვნის სახით, ჩვენი კვლევა აჩვენებს, რომ LTE-1800 MHz სიხშირეზე ერთჯერადი ზემოქმედება მხოლოდ თავის არეში ხელს უშლის კორტიკალური ნეირონების ნეირონულ რეაქციებს სენსორულ სტიმულებზე. GSM სიგნალიზაციის ეფექტების წინა დახასიათების შესაბამისად, ჩვენი შედეგები მიუთითებს, რომ LTE სიგნალიზაციის ნეირონულ აქტივობაზე გავლენა ჯანმრთელობის მდგომარეობის მიხედვით იცვლება. მწვავე ნეიროანთება ნეირონებს LTE-1800 MHz სიხშირეზე მგრძნობელობას მატებს, რაც იწვევს სმენითი სტიმულების კორტიკალური დამუშავების ცვლილებას.
მონაცემები შეგროვდა 55 დღის ასაკში ჟანვიეს ლაბორატორიაში მიღებული 31 ზრდასრული მამრი ვირთხის ცერებრალური ქერქიდან. ვირთხები მოათავსეს ტენიანობის (50-55%) და ტემპერატურის (22-24 °C) კონტროლირებად შენობაში, 12 საათიანი/12 საათიანი სინათლის/სიბნელის ციკლით (შუქი ითიშება დილის 7:30 საათზე), საკვებსა და წყალზე თავისუფალი წვდომით. ყველა ექსპერიმენტი ჩატარდა ევროპის საზოგადოებების საბჭოს დირექტივით (2010/63/EU საბჭოს დირექტივა) დადგენილი სახელმძღვანელო პრინციპების შესაბამისად, რომლებიც მსგავსია ნეირომეცნიერების საზოგადოების ნეირომეცნიერების კვლევაში ცხოველების გამოყენების სახელმძღვანელო პრინციპებში აღწერილისა. ეს პროტოკოლი დამტკიცდა პარიზი-საუდის ცენტრის ეთიკის კომიტეტის (CEEA N°59, პროექტი 2014-25, ეროვნული პროტოკოლი 03729.02) მიერ, ამ კომიტეტის მიერ ვალიდირებული 32-2011 და 34-2012 პროცედურების გამოყენებით.
ცხოველები LPS დამუშავებამდე (ან LTE-EMF-ის ზემოქმედებამდე) მინიმუმ 1 კვირის განმავლობაში იყვნენ მიჩვეულები კოლონიურ კამერებს.
ოცდაორ ვირთხას ინტრაპერიტონეალურად (ip) გაუკეთდა E. coli LPS (250 მკგ/კგ, სეროტიპი 0127:B8, SIGMA), განზავებული სტერილური ენდოტოქსინისგან თავისუფალი იზოტონური ფიზიოლოგიური ხსნარით LTE-მდე ან ფიქტიური ზემოქმედებამდე 24 საათით ადრე (n ჯგუფში). = 11). 2 თვის Wistar-ის მამრ ვირთხებში, LPS-ით მკურნალობა იწვევს ნეიროანთებით პასუხს, რომელიც აღინიშნება თავის ტვინის ქერქში რამდენიმე პროანთებითი გენით (სიმსივნის ნეკროზის ფაქტორი-ალფა, ინტერლეიკინი 1ß, CCL2, NOX2, NOS2), რომლებიც მომატებული იყო LPS ინექციიდან 24 საათის შემდეგ, მათ შორის NOX2 ფერმენტის და ინტერლეიკინი 1ß-ის კოდირების ტრანსკრიპტების დონის 4-ჯერ და 12-ჯერ ზრდა, შესაბამისად. ამ 24-საათიან წერტილში, კორტიკალურ მიკროგლიაში გამოვლინდა უჯრედების LPS-ით გამოწვეული პროანთებითი აქტივაციის შედეგად მოსალოდნელი ტიპური „მკვრივი“ უჯრედული მორფოლოგია (სურათი 1), რაც განსხვავდება სხვა უჯრედებით გამოწვეული LPS-ით გამოწვეული აქტივაციისგან. უჯრედული პროანთებითი აქტივაცია შეესაბამება 24, 61-ს.
LTE ელექტრომაგნიტური ველის მხოლოდ თავის ზემოქმედება ჩატარდა GSM ელექტრომაგნიტური ველის26 ეფექტის შესაფასებლად ადრე გამოყენებული ექსპერიმენტული სისტემის გამოყენებით. LTE ზემოქმედება ჩატარდა LPS ინექციიდან 24 საათის შემდეგ (11 ცხოველი) ან LPS-ით მკურნალობის გარეშე (5 ცხოველი). ცხოველებს ზემოქმედებამდე მსუბუქი ანესთეზია ჩაუტარდათ კეტამინით/ქსილაზინით (კეტამინი 80 მგ/კგ, ip; ქსილაზინი 10 მგ/კგ, ip) მოძრაობის თავიდან ასაცილებლად და იმის უზრუნველსაყოფად, რომ ცხოველის თავი იმყოფებოდა LTE სიგნალის გამომცემ მარყუჟოვან ანტენაში. განმეორებადი მდებარეობა ქვემოთ. ერთი და იგივე გალიიდან ვირთხების ნახევარი საკონტროლო ჯგუფად იქცა (11 ცრუ ექსპოზიციის მქონე ცხოველი, LPS-ით წინასწარ დამუშავებული 22 ვირთხიდან): ისინი მოათავსეს მარყუჟოვანი ანტენის ქვეშ და LTE სიგნალის ენერგია ნულზე დააყენეს. ზემოქმედებაში მყოფი და ცრუ ექსპოზიციის მქონე ცხოველების წონა მსგავსი იყო (p = 0.558, დაუწყვილებელი t-ტესტი, ns). ყველა ანესთეზირებული ცხოველი მოათავსეს ლითონისგან თავისუფალ გამათბობელ ბალიშზე, რათა მათი სხეულის ტემპერატურა მთელი პროცესის განმავლობაში დაახლოებით 37°C-ზე შენარჩუნებულიყო. ექსპერიმენტი. როგორც წინა ექსპერიმენტებში, ექსპოზიციის დრო 2 საათზე იყო დაყენებული. ექსპოზიციის შემდეგ, ცხოველი საოპერაციო ოთახში სხვა გამათბობელ ბალიშზე მოათავსეს. იგივე ექსპოზიციის პროცედურა გამოყენებული იქნა 10 ჯანმრთელ ვირთხაზე (LPS-ით მკურნალობის გარეშე), რომელთა ნახევარი იმავე გალიიდან ცრუ ექსპოზიციის ქვეშ იმყოფებოდა (p = 0.694).
ექსპოზიციის სისტემა მსგავსი იყო წინა კვლევებში აღწერილი სისტემებისა 25, 62, რადიოსიხშირული გენერატორის შეცვლით, რათა გენერირებულიყო LTE GSM ელექტრომაგნიტური ველების ნაცვლად. მოკლედ, RF გენერატორი (SMBV100A, 3.2 GHz, Rohde & Schwarz, გერმანია), რომელიც ასხივებდა LTE - 1800 MHz ელექტრომაგნიტურ ველს, დაკავშირებული იყო სიმძლავრის გამაძლიერებელთან (ZHL-4W-422+, Mini-Circuits, აშშ), ცირკულატორთან (D3 1719-N, სოდი, საფრანგეთი), ორმხრივ შემაერთებელთან (CD D 1824-2, − 30 dB, სოდი, საფრანგეთი) და ოთხმხრივ სიმძლავრის გამყოფთან (DC D 0922-4N, სოდი, საფრანგეთი), რაც საშუალებას იძლეოდა ერთდროულად ოთხი ცხოველის ექსპოზიციის. ორმხრივ შემაერთებელთან დაკავშირებული სიმძლავრის მრიცხველი (N1921A, Agilent, აშშ) საშუალებას იძლეოდა მოწყობილობის შიგნით ინციდენტური და არეკლილი სიმძლავრის უწყვეტი გაზომვისა და მონიტორინგისთვის. თითოეული გამომავალი დაკავშირებული იყო მარყუჟოვან ანტენასთან (Sama-Sistemi srl; Roma), რაც ცხოველის თავის ნაწილობრივ ექსპოზიციას უზრუნველყოფს. მარყუჟის ანტენა შედგება დაბეჭდილი სქემისგან, რომელსაც აქვს ორი ლითონის ხაზი (დიელექტრიკული მუდმივა εr = 4.6), რომლებიც ამოტვიფრულია იზოლატორ ეპოქსიდური სუბსტრატზე. ერთ ბოლოში, მოწყობილობა შედგება 1 მმ სიგანის მავთულისგან, რომელიც ქმნის რგოლს, რომელიც მოთავსებულია ცხოველის თავთან ახლოს. როგორც წინა კვლევებში26,62, სპეციფიკური შთანთქმის სიჩქარე (SAR) განისაზღვრა რიცხვითი ვირთხის მოდელის და სასრული სხვაობის დროის დომენის (FDTD) მეთოდის გამოყენებით63,64,65. ისინი ასევე განისაზღვრა ექსპერიმენტულად ერთგვაროვან ვირთხის მოდელში Luxtron-ის ზონდების გამოყენებით ტემპერატურის მატების გასაზომად. ამ შემთხვევაში, SAR W/kg-ში გამოითვლება ფორმულით: SAR = C ΔT/Δt, სადაც C არის სითბოტევადობა J/(კგ K), ΔT, °K-ში და Δt ტემპერატურის ცვლილება, დრო წამებში. რიცხვითი განსაზღვრული SAR მნიშვნელობები შედარებული იყო ერთგვაროვანი მოდელის გამოყენებით მიღებულ ექსპერიმენტულ SAR მნიშვნელობებთან, განსაკუთრებით ვირთხის ტვინის ეკვივალენტურ რეგიონებში. რიცხვითი SAR გაზომვებსა და ექსპერიმენტულად აღმოჩენილ SAR-ის მაჩვენებლები 30%-ზე ნაკლებია.
სურათი 2ა გვიჩვენებს ვირთხის ტვინში SAR-ის განაწილებას ვირთხის მოდელში, რომელიც ემთხვევა ჩვენს კვლევაში გამოყენებული ვირთხების სხეულის წონისა და ზომის განაწილებას. ტვინის საშუალო SAR იყო 0.37 ± 0.23 ვტ/კგ (საშუალო ± სტანდარტული გადახრა). SAR-ის მნიშვნელობები ყველაზე მაღალია კორტიკალურ არეში, მარყუჟოვანი ანტენის ქვემოთ. ACx-ში (SARACx) ლოკალური SAR იყო 0.50 ± 0.08 ვტ/კგ (საშუალო ± სტანდარტული გადახრა) (სურ. 2ბ). ვინაიდან ექსპოზიციის ქვეშ მყოფი ვირთხების სხეულის წონა ერთგვაროვანია და თავის ქსოვილის სისქის სხვაობა უმნიშვნელოა, ACx-ის ან სხვა კორტიკალური უბნების ფაქტობრივი SAR, სავარაუდოდ, ძალიან მსგავსი იქნება ერთ ექსპოზიციის ქვეშ მყოფ ცხოველსა და მეორეს შორის.
ექსპოზიციის დასრულების შემდეგ, ცხოველებს დამატებით მიეცათ კეტამინის (20 მგ/კგ, ი.პ.) და ქსილაზინის (4 მგ/კგ, ი.პ.) დამატებითი დოზები მანამ, სანამ უკანა თათის მოჭერის შემდეგ რეფლექსური მოძრაობები აღარ შეინიშნებოდა. ადგილობრივი ანესთეტიკი (ქსილოკაინი 2%) კანქვეშ შეჰყავდათ კანსა და თავის ქალის ზემოთ მდებარე საფეთქლის კუნთში და ცხოველები მოათავსეს ლითონისგან თავისუფალ გათბობის სისტემაზე. ცხოველის სტერეოტაქსურ ჩარჩოში მოთავსების შემდეგ, მარცხენა საფეთქლის ქერქზე ჩატარდა კრანიოტომია. როგორც ჩვენს წინა კვლევაში66, პარიეტალური და საფეთქლის ძვლების შეერთებიდან დაწყებული, ღიობი იყო 9 მმ სიგანის და 5 მმ სიმაღლის. ACx-ის ზემოთ მდებარე მაგარი გარსი ფრთხილად ამოიღეს ბინოკულარული კონტროლის ქვეშ, სისხლძარღვების დაზიანების გარეშე. პროცედურის დასრულების შემდეგ, ჩაწერის დროს ცხოველის თავის ატრავმული ფიქსაციისთვის ააგეს ბაზა სტომატოლოგიური აკრილის ცემენტიდან. ცხოველის დამჭერი სტერეოტაქსური ჩარჩო მოათავსეთ აკუსტიკური შესუსტების კამერაში (IAC, მოდელი AC1).
მონაცემები მიღებული იქნა 20 ვირთხის პირველადი აუდიტორული ქერქის მრავალერთეულიანი ჩანაწერებიდან, მათ შორის 10 ცხოველი, რომლებიც წინასწარ დამუშავებულნი იყვნენ LPS-ით. უჯრედგარე ჩანაწერები მიღებული იქნა 16 ვოლფრამის ელექტროდის მასივიდან (TDT, ø: 33 µm, < 1 MΩ), რომელიც შედგებოდა 8 ელექტროდის ორი რიგისგან, რომლებიც განლაგებული იყო 1000 µm დაშორებით (350 µm ელექტროდებს შორის იმავე რიგში). საფეთქლის ძვალსა და კონტრალატერალურ მაგარი გარსს შორის ჩასმული იყო ვერცხლის მავთული (ø: 300 µm) დამიწებისთვის. პირველადი ACx-ის სავარაუდო მდებარეობაა ბრეგმის უკან 4-7 მმ და სუპრატემპორალური ნაკერიდან 3 მმ ვენტრალურად. ნედლი სიგნალი გაძლიერდა 10,000-ჯერ (TDT Medusa) და შემდეგ დამუშავდა მრავალარხიანი მონაცემთა შეგროვების სისტემით (RX5, TDT). თითოეული ელექტროდიდან შეგროვებული სიგნალები გაფილტრული იყო (610–10,000 Hz) მრავალერთეულიანი აქტივობის (MUA) გამოსავლენად. ტრიგერის დონეები ფრთხილად იყო დაყენებული თითოეული ელექტროდისთვის (თანაავტორების მიერ). სიგნალიდან ყველაზე დიდი მოქმედების პოტენციალის შესარჩევად (დაუჯერებელი ან ცრუ-დაფარული მდგომარეობები). ტალღური ფორმების ონლაინ და ოფლაინ შემოწმებამ აჩვენა, რომ აქ შეგროვებული MUA შედგებოდა ელექტროდებთან ახლოს 3-დან 6 ნეირონამდე გენერირებული მოქმედების პოტენციალებისგან. თითოეული ექსპერიმენტის დასაწყისში ჩვენ დავაყენეთ ელექტროდების მასივის პოზიცია ისე, რომ რვა ელექტროდისგან შემდგარი ორი რიგისთვის შესაძლებელი ყოფილიყო ნეირონების ნიმუშების აღება, დაბალიდან მაღალ სიხშირულ რეაქციებამდე, როსტრალური ორიენტაციით შესრულებისას.
აკუსტიკური სტიმულები გენერირებული იქნა Matlab-ში, გადაეცა RP2.1-ზე დაფუძნებულ ხმის მიწოდების სისტემას (TDT) და გაიგზავნა Fostex-ის დინამიკში (FE87E). დინამიკი განთავსებული იყო ვირთხის მარჯვენა ყურიდან 2 სმ-ის დაშორებით, რა მანძილზეც დინამიკი წარმოქმნიდა ბრტყელ სიხშირის სპექტრს (± 3 dB) 140 ჰც-დან 36 კჰც-მდე. დინამიკის კალიბრაცია განხორციელდა ხმაურისა და სუფთა ტონების გამოყენებით, რომლებიც ჩაწერილი იყო Bruel and Kjaer მიკროფონით 4133, რომელიც დაკავშირებული იყო წინასწარ გამაძლიერებელ B&K 2169-თან და ციფრულ ჩამწერ Marantz PMD671-თან. სპექტრული დროის მიმღები ველი (STRF) განისაზღვრა 97 გამა-ტონის სიხშირის გამოყენებით, რომელიც მოიცავდა 8 (0.14–36 kHz) ოქტავას, წარმოდგენილი შემთხვევითი თანმიმდევრობით 75 dB SPL-ზე 4.15 ჰც-ზე. სიხშირის რეაქციის არეალი (FRA) განისაზღვრება ტონების იგივე ნაკრების გამოყენებით და წარმოდგენილია შემთხვევითი თანმიმდევრობით 2 ჰც-ზე 75-დან 5 dB SPL-მდე. თითოეული სიხშირე წარმოდგენილია რვაჯერ თითოეულ ინტენსივობა.
ასევე შეფასდა ბუნებრივ სტიმულებზე რეაქციები. წინა კვლევებში ჩვენ დავაკვირდით, რომ ვირთხების ვოკალიზაციები იშვიათად იწვევდა ძლიერ რეაქციებს ACx-ში, ნეირონული ოპტიმალური სიხშირის (BF) მიუხედავად, მაშინ როდესაც ქსენოტრანსპლანტატ-სპეციფიკური (მაგ., მგალობელი ჩიტების ან ზღვის გოჭების ვოკალიზაციები) როგორც წესი, მთელ ტონალურ რუკას. ამიტომ, ჩვენ გამოვცადეთ ზღვის გოჭების კორტიკალური რეაქციები ვოკალიზაციებზე (36-ში გამოყენებული სასტვენი დაკავშირებული იყო სტიმულის 1 წამთან, წარმოდგენილი 25-ჯერ).

ასევე შეგვიძლია თქვენი მოთხოვნების შესაბამისად მოვარგოთ RF პასიური კომპონენტები. თქვენ შეგიძლიათ შეხვიდეთ მორგების გვერდზე, რათა მოგვაწოდოთ თქვენთვის საჭირო სპეციფიკაციები.
https://www.keenlion.com/customization/

ემალი:
sales@keenlion.com
tom@keenlion.com